Свою кар'єру розпочинав як учасник талант-шоу «Пошук зірок» (Star Search, 1991), після чого знімався у телешоу «Клуб Міккі Мауса» з іншими молодими талантами як Крістіна Агілера та Брітні Спірс (1993—1994). Світову славу отримав у кінці 1990-х як лідер гурту 'N Sync.
У 2002 випустив свій дебютний сольний альбом «Justified», який було продано в обсязі понад 7 мільйонів копій. Альбом становив значний комерційний успіх та породив такі хіти як «Cry Me a River» та «Rock Your Body». Другим сольним альбомом Тімберлейка став «FutureSex/LoveSounds» (2006), що отримав найвищу сходинку у американському рейтингу альбомів Billboard 200 та включив такі популярні сингли як «SexyBack», «My Love» та «What Goes Around…/…Comes Around», що по черзі отримали першу позицію у рейтингу пісень Billboard Hot 100.
Перші два альбоми Джастіна Тімберлейка, кількість проданих копій яких сукупно перевищила 14 мільйонів, зробили його одним з комерційно найуспішніших співаків світу. Окрім музики, Джастін розпочав акторську кар'єру, у той час як його починання включають музичний лейбл «Tennman Records», марку вбрання «William Rast», а також ресторанний бізнес.